Остерман Л.А. «Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие)» 1981 год
Автор: Остерман Л.А.
Год: 1981
В книге детально описана современная аппаратура, изложены практические приемы постановки экспериментов, проанализировано влияние на их результаты различных физико-химических параметров. Рассмотрены все варианты и модификации описываемых методов. Даны ссылки на оригинальные экспериментальные работы, опубликованные в ведущих журналах мира по декабрь 1980 г.
Книга рассчитана на биохимиков, медиков, фармакологов, работников пищевой промышленности.
- Часть первая. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ
- - Введение
- - Глава 1. Гели для электрофореза
- - - Полиакриламидный гель (ПААГ)
- - - - Исходные материалы
- - - - Процесс полимеризации ПААГ
- - - - Выбор концентраций мономеров
- - - Агароза
- - - Смешанный гель (агароза+ПААГ)
- - - Ацетатцеллюлозная пленка, импрегнированная ПААГ
- - Глава 2. Техника приготовления гелей и аппаратура
- - - Вертикально расположенные трубки
- - - Вертикально расположенные пластины
- - - Горизонтально расположенные пластины
- - Глава 3. Электрофорез белков
- - - Замечания общего характера
- - - - Миграция белков в геле
- - - - Напряженность электрического поля (H)
- - - - Выбор буфера рабочего геля
- - - - Выделение тепла при электрофорезе
- - - - Загрузка геля. Ширина белковых зон
- - - - Введение мочевины и бета-меркаптоэтанола. Некоторые артефакты
- - - - Лидирующие красители
- - - Разделение белков по размерам и заряду
- - - - Выбор рабочего буфера
- - - - Использование мочевины
- - - - Загрузка геля и подготовка препарата
- - - - Некоторые примеры
- - - Разделение белков по размеру с использованием ДДС-Na
- - - - Существо метода
- - - - Выбор пористости геля
- - - - Присутствие мочевины и нейояных детергентов
- - - - Выбор рабочего буфера геля
- - - - Подготовка белкового препарата
- - - - Проведение электрофореза
- - - - Окрашивание и элюция белков
- - - Ступенчатый электрофорез (disc-electrophoresis)
- - - Градиент пористости ПААГ
- - - Двумерный электрофорез в ПААГ
- - - Электрофорез с использованием Тритона Х-100 в цетавлона
- - - - Тритон Х-100
- - - - Цетавлон
- - - Окрашивание белков в ПААГ
- - - - Кислые красители
- - - - Другие красители и методы окрашивания
- - - - Флюоресцентные красители
- - - - Локализация ферментов после электрофореза
- - - - Локализация белковых полос осаждением ДДС-Na
- - - Элюция белков из геля
- - - - Определение радиоактивности белков после электрофореза в ПААГ
- - - - Счет радиоактивности в элюатах белка
- - - - Растворение ПААГ
- - - - Импрегнирование сцинтиллятора в гель
- - - - Авторадиография
- - - - Флюорография
- - - Препаративный электрофорез белков
- - Глава 4. Электрофорез нуклеиновых кислот
- - - Замечания общего характера
- - - - Выбор буфера геля и напряженности электрического поля
- - - - Выбор характера геля и его пористости
- - - - Влияние вторичной структуры
- - - - Маркерные молекулы
- - - - Лидирующие красители
- - - Электрофорез в мягких условиях
- - - - Фракционирование плазмид и фрагментов ДНК
- - - - Фракционирование РНК
- - - Электрофорез в денатурирующих гелях
- - - - Щелочные гели
- - - - Гели, содержащие мочевину. Секвенирование ДНК и РНК
- - - - Денатурирующие гели с формамидом
- - - - Денатурирующие гели с формальдегидом
- - - - Гели, содержащие гидроокись метилртути
- - - - Денатурация нуклеиновых кислот глиоксалем
- - - Использование градиентов пористости ПААГ
- - - Двумерный электрофорез нуклеиновых кислот и их фрагментов
- - - Некоторые особые случаи электрофореза нуклеиновых кислот
- - - - Электрофорез в геле агарозы тройного комплекса ДНК—РНК-полимераза—РНК
- - - - Выявление мРНК при электрофорезе суммарной РНК в геле агарозы
- - - - Использование жидкого (не сшитого) ПААГ
- - - Окрашивание нуклеиновых кислот после электрофореза
- - - Элюция нуклеиновых кислот из гелей
- - - - Элюция из ПААГ за счет диффузии
- - - - Элюция из гелей агарозы
- - - - Электрофоретическая элюция
- - - - Перенос нуклеиновых кислот из геля на нитроцеллюлозные фильтры и диазобумагу
- - - Определение радиоактивности
- - - Препаративный электрофорез нуклеиновых кислот
- - Литература
- Часть вторая. УЛЬТРАЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ
- - Введение
- - Глава 1. Основные понятия теории седиментации
- - Глава 2. Ультрацентрифуга
- - - Принцип действия и расположение важнейших узлов
- - - Проверка готовности основных систем к пуску
- - - Пуск центрифуги
- - Глава 3. Роторы и пробирки
- - - Угловые роторы
- - - Пробирки для угловых роторов
- - - Уход за роторами и пробирками
- - - Роторы со свободно подвешенными пробирками (бакет-роторы)
- - - Роторы с вертикальными пробирками
- - - Максимально допустимая частота вращения ротора
- - - Зональные роторы
- - - Особенности эксплуатации и ухода
- - Глава 4. Раздельное осаждение частиц (дифференциальное центрифугирование)
- - Глава 5. Зонально-скоростное центрифугирование
- - - Константа седиментации
- - - Изокинетический градиент плотности
- - - Выбор среды
- - - Характеристики растворов сахарозы
- - - Профиль градиента сахарозы
- - - Создание градиента плотности сахарозы
- - - Наслоение препарата на градиент
- - - Фракционирование («раскапывание») градиента
- - - Выбор режима центрифугирования
- - - Некоторые примеры центрифугирования в градиентах сахарозы
- - - - Фракционирование рибонуклеопротеидов
- - - - Фракционирование РНК
- - - - Фракционирование ДНК
- - Глава 6. Равновесное (изопикническое) центрифугирование
- - - Способы образования и общая характеристика градиентов плотности
- - - Выбор соли для создания градиента плотности
- - - Градиенты плотности растворов CsCl
- - - - Преформирование градиента
- - - - Равновесное центрифугирование в угловых роторах
- - - - Центрифугирование в роторах с вертикальными пробирками
- - - - Фракционирование и детектирование равновесных градиентов
- - - - Примеры центрифугирования в градиентах плотности растворов CsCl
- - - Градиенты плотности растворов Cs2SO4
- - - Градиенты плотности три хлор ацетатов цезия и рубидия
- - - Градиенты плотности растворов KI и NaI
- - - Градиенты плотности растворов метризамида
- - Глава 7. Центрифугирование в зональных роторах
- - Литература
- - Предметный указатель